切片厚度选择:从包埋块中切取薄片时,通常选择4~5微米厚度,这一厚度最适合大多数染色技术,确保细胞结构的清晰可见而不会产生重叠影响。
微切片技术:使用显微切片机平稳操作,保证切片的均匀和连续。
2.切片处理
烘干:将切片放置在滑片上,通常在37℃下烘干数小时,有时过夜,以固定组织在滑片上。
脱蜡:为了去除石蜡并使组织准备好染色,切片需要在二甲苯中处理,随后用系列浓度的酒精进行水化处理。
脱蜡:为了去除石蜡并使组织准备好染色,切片需要在二甲苯中处理,随后用系列浓度的酒精进行水化处理。
染色(以HE染色为例)
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1.试剂配制
固定液:10%甲醛溶液;
苏木精染液:称取苏木精粉0.5g,铵矾24g溶解于70ml蒸馏水中,然后取31g的NaIO,5ml水,再加入30ml甘油和2ml冰醋酸,混合均匀,滤纸过滤,备用;
伊红染液:称取0.5g水溶性伊红染液,溶于100ml蒸馏水中;
稀盐酸乙醇溶液:用75%乙醇配制1%盐酸;
系列浓度的乙醇、二甲苯、中性树胶。
2.实验步骤
①石蜡切片脱蜡至水
依次将切片放入二甲苯Ⅰ10min-->二甲苯Ⅱ10min-->无水乙醇Ⅰ5min-->无水乙醇Ⅱ5min-->95%酒精5min-->95%酒精5min-->80%酒精5min-->自来水冲洗。
②苏木素染细胞核
切片放入苏木素染3-8min,自来水冲洗,接着用1%的盐酸酒精分化数秒,自来水冲洗,最后用0.6%氨水返蓝,流水冲洗。
③伊红染细胞质
切片入伊红染液中染色1-3min。
④脱水封片
将切片依次放入95%酒精Ⅰ5min-->95%酒精Ⅱ5min-->无水乙醇Ⅰ5min-->无水乙醇Ⅱ5min-->二甲苯Ⅰ5min-->二甲苯Ⅱ5min中脱水透明,将切片从二甲苯拿出来稍晾干,中性树胶封片。
⑤显微镜镜检,图像采集分析
细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色,软骨基质、钙盐颗粒呈深蓝色,粘液呈灰蓝色,细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色,胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色,胶原纤维呈淡粉红色,弹力纤维呈亮粉红色,红血球呈橘红色,蛋白性液体呈粉红色。
3.常见染色方法
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4.各类组织常见染色方法及指标
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每种染色方法都有其优点和限制,需要根据具体需求选择合适的方法,并注意控制实验条件以获得可靠的结果。
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